“單表位多抗" 是基于 “單一確定序列多肽免疫" 制備的特殊多克隆抗體,核心特征是 “免疫原單一化 + 表位only性":
區(qū)別于傳統(tǒng)多抗(以完整蛋白/ 復(fù)雜抗原免疫),其免疫原是氨基酸序列明確的單一多肽—— 該多肽通常對(duì)應(yīng)目標(biāo)蛋白的特定功能區(qū)域(如活性位點(diǎn)、修飾位點(diǎn)),且可通過(guò)設(shè)計(jì)控制長(zhǎng)度(通常 10-15 個(gè)氨基酸)以避免多表位風(fēng)險(xiǎn)。免疫后,機(jī)體僅被誘導(dǎo)產(chǎn)生針對(duì)這一特定多肽表位的多克隆抗體(即多個(gè) B 細(xì)胞克隆均靶向同一表位),因 “源于多克隆抗體庫(kù)",故得名 “單表位多抗"。隨著蛋白數(shù)據(jù)庫(kù)和結(jié)構(gòu)生物學(xué)的發(fā)展,“單表位多抗"在生物學(xué)研究中逐漸顯現(xiàn)諸多優(yōu)勢(shì)。
2.1表位確定性:短肽設(shè)計(jì)鎖定識(shí)別位點(diǎn)
傳統(tǒng)多抗以完整蛋白或復(fù)雜抗原免疫時(shí),機(jī)體將針對(duì)抗原上的多個(gè)表位產(chǎn)生抗體(如一個(gè)蛋白可能含5-10 個(gè)免疫原性表位),導(dǎo)致最終抗體混合物表位混雜,易出現(xiàn)交叉反應(yīng)(如與同源蛋白的相似表位結(jié)合)。
我公司結(jié)合多年抗體開(kāi)發(fā)經(jīng)驗(yàn),設(shè)計(jì)“單表位多抗" 通過(guò) “短肽設(shè)計(jì)+ 單一多肽免疫" 從源頭鎖定表位:
2.1.1 短肽物理層面杜絕多表位:10-15 個(gè)氨基酸的短肽空間結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單,通常僅含一個(gè)免疫原性表位,避免傳統(tǒng)完整蛋白或長(zhǎng)肽(>20 個(gè)氨基酸)因序列過(guò)長(zhǎng)導(dǎo)致的 “多表位混雜" 問(wèn)題;
2.1.2 免疫導(dǎo)向聚焦單一表位:免疫原僅含一個(gè)確定的短肽序列,直接引導(dǎo)免疫系統(tǒng)聚焦該特定表位,最終獲得的多抗雖源于多個(gè)B 細(xì)胞克隆,但所有抗體均靶向同一表位;
2.1.3 按需定制靶向區(qū)域:可根據(jù)研究需求精準(zhǔn)選擇短肽(如針對(duì)蛋白磷酸化位點(diǎn)、活性中心的10-12 個(gè)氨基酸短肽),實(shí)現(xiàn) “表位定制化",從根本上解決傳統(tǒng)多抗 “識(shí)別模糊" 的問(wèn)題,尤其適配蛋白修飾檢測(cè)、特定功能域靶向(如受體結(jié)合域)等場(chǎng)景;
2.1.4 多肽免疫原的物理特性控制:以我公司二十年的多肽抗體研發(fā)制備“功力",可保證多肽免疫原的可溶性、穩(wěn)定性、偶聯(lián)一致性、免疫原性等重要指標(biāo),從而保證抗體制備成功率在90%以上。
在抗體應(yīng)用中,“結(jié)合位點(diǎn)的精準(zhǔn)性、真實(shí)性與可控性" 是核心需求,而傳統(tǒng)單抗與多抗均存在明顯短板,“單表位多抗" 通過(guò)多肽免疫的特性,形成解決方案:
2.2.1 解決單抗結(jié)合位點(diǎn)未知的“盲目性" 痛點(diǎn):傳統(tǒng)單抗雖表位單一,但制備時(shí)無(wú)法預(yù)先確定結(jié)合位點(diǎn)(需后續(xù)通過(guò)表位mapping 實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證,耗時(shí) 1-2 周),在關(guān)鍵實(shí)驗(yàn)中易踩坑 。而 “單表位多抗" 的結(jié)合位點(diǎn)即免疫用短肽對(duì)應(yīng)的序列,無(wú)需額外驗(yàn)證,直接適配高要求場(chǎng)景如:
?抗體配對(duì):雙抗夾心ELISA 中,可直接選擇靶向蛋白不同區(qū)域的短肽制備抗體,確保捕獲與檢測(cè)位點(diǎn)不重疊,配對(duì)成功率比傳統(tǒng)單抗提升;
?中和抗體研發(fā):以活性位點(diǎn)短肽為免疫原,抗體可直接結(jié)合目標(biāo)蛋白功能區(qū)域(如受體結(jié)合域、酶活性中心),無(wú)需從大量單抗中篩選中和活性克隆,大幅縮短研發(fā)周期;
?(藥物靶點(diǎn)/ 酶)活性調(diào)控:針對(duì)靶點(diǎn)活性中心設(shè)計(jì)短肽,抗體可精準(zhǔn)干預(yù)功能,避免傳統(tǒng)單抗因結(jié)合非活性位點(diǎn)導(dǎo)致的“無(wú)效調(diào)控";
?Co-IP 與亞細(xì)胞定位:選擇非互作區(qū)域/ 特定結(jié)構(gòu)域短肽,確保捕獲蛋白時(shí)保留互作復(fù)合物、定位時(shí)精準(zhǔn)指向膜內(nèi)或膜外;
2.2.2 規(guī)避單抗表位mapping 的 “假陽(yáng)性" 陷阱:蛋白制備的單抗即便通過(guò)mapping,篩選出的肽段也可能位于蛋白空間結(jié)構(gòu)中心(天然狀態(tài)下被遮蔽,不暴露于表面),導(dǎo)致抗體能結(jié)合合成肽段卻無(wú)法識(shí)別天然蛋白——“單表位多抗" 的短肽優(yōu)先選取蛋白表面暴露區(qū)域(如AlphaFold 預(yù)測(cè)的親水性結(jié)構(gòu)、已知功能域暴露位點(diǎn)),且短肽更易模擬天然構(gòu)象,從源頭保證結(jié)合序列的真實(shí)性,確??贵w能識(shí)別天然樣本中的完整蛋白;
2.2.3 實(shí)現(xiàn)種屬反應(yīng)的“精準(zhǔn)可控":通過(guò)UniProt、NCBI 等數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì)短肽與不同種屬蛋白的同源性,可預(yù)先定制抗體的種屬特異性:
1.需“種屬專(zhuān)屬"(如僅識(shí)別人源、不識(shí)別小鼠源):篩選人源蛋白中與小鼠差異大的短肽;
2.需“跨種屬識(shí)別"(如同時(shí)識(shí)別人、大鼠、兔源):選擇高度保守短肽;
而傳統(tǒng)蛋白制備抗體因含多個(gè)表位(保守+ 物種特異性),種屬反應(yīng)范圍基本無(wú)法預(yù)測(cè);
2.2.4 強(qiáng)化抗干擾能力與技術(shù)兼容性:可通過(guò)蛋白數(shù)據(jù)庫(kù)BLAST比對(duì),僅識(shí)別特定短肽表位,可有效規(guī)避樣本中同源蛋白、雜蛋白的干擾;同時(shí)雖為多抗,但可像單抗一樣適配 Western Blot、ELISA、免疫組化(IHC)等技術(shù),且多抗的 “多分子結(jié)合" 特性在實(shí)驗(yàn)中可實(shí)現(xiàn)多倍信號(hào)放大,兼顧特異性與靈敏度。
傳統(tǒng)多抗的批間差主要源于“免疫原差異" 與 “動(dòng)物個(gè)體反應(yīng)差異":不同批次完整蛋白抗原可能含雜蛋白、純度波動(dòng),且動(dòng)物免疫應(yīng)答強(qiáng)度、親和力存在個(gè)體差異,導(dǎo)致批間效價(jià)波動(dòng)。“單表位多抗" 通過(guò) “免疫原固定化+ 流程標(biāo)準(zhǔn)化" 解決這一問(wèn)題:
2.3.1 免疫原是化學(xué)合成的單一短肽,序列、純度可嚴(yán)格控制(如HPLC 純度>95%),不同批次無(wú)本質(zhì)差異;
2.3.2 免疫過(guò)程(動(dòng)物品系、劑量、周期、采血時(shí)間)可標(biāo)準(zhǔn)化,減少個(gè)體差異影響;
2.3.3 進(jìn)一步地,通過(guò)我公司“批批必檢"的質(zhì)控要求,最終批間效價(jià)偏差可控制在<10%,接近單抗的批間一致性水平,滿足科研重復(fù)性需求。
傳統(tǒng)單抗需“免疫 - 細(xì)胞融合 - 雜交瘤篩選 - 克隆純化"(全程 2-3 個(gè)月),技術(shù)難度高、成本高;傳統(tǒng)多抗雖快但表位混雜,“單表位多抗" 平衡兩者優(yōu)勢(shì):
2.4.1 周期短:無(wú)需雜交瘤篩選,僅需“短肽合成(1周,效率遠(yuǎn)高于蛋白表達(dá))+ 動(dòng)物免疫(3-4 周)+ 血清純化(1 周)",全程 4-6 周,而單抗制備需要接近6個(gè)月,縮短70%以上,比傳統(tǒng)多抗制備還快;
2.4.2 成本低:省去雜交瘤篩選的人力、設(shè)備成本(如細(xì)胞培養(yǎng)箱、流式細(xì)胞儀),短肽合成成本低于蛋白表達(dá),規(guī)?;苽鋾r(shí)單位抗體成本僅為單抗的1/4-1/6,適合科研多靶點(diǎn)檢測(cè)、企業(yè)低成本批量開(kāi)發(fā)檢測(cè)試劑。
“單表位多抗" 的核心價(jià)值在于:以多抗的制備效率,實(shí)現(xiàn)單抗的表位特異性,同時(shí)通過(guò) “抗體結(jié)合位點(diǎn)的解決方案",彌補(bǔ)傳統(tǒng)抗體在結(jié)合位點(diǎn)精準(zhǔn)性、真實(shí)性、可控性上的短板 —— 既解決傳統(tǒng)多抗 “表位混雜、批間差大" 的問(wèn)題,又規(guī)避單抗 “周期長(zhǎng)、成本高、結(jié)合位點(diǎn)未知、種屬不可控" 的局限,為生物醫(yī)藥領(lǐng)域提供 “高特異性、高穩(wěn)定性、高性?xún)r(jià)比、結(jié)合位點(diǎn)明確可控" 的抗體選擇,廣泛適配蛋白檢測(cè)、診斷試劑、科研探索、藥物靶點(diǎn)驗(yàn)證等場(chǎng)景。
順便提示,我們還可基于相同的“精準(zhǔn)表位設(shè)計(jì)" 邏輯,為您定制“單表位單抗" —— 讓科學(xué)家們也體驗(yàn)一下“用精準(zhǔn)大狙對(duì)準(zhǔn)所需蛋白位點(diǎn)的爽感"。